如何通過酶聯免疫吸附測定水產品中的組胺殘留

發布時間： 2024-05-08　　點擊次數： 881次

組胺（Histamine）是一種分子量只有 111 u 的小分子堿。組胺廣泛存在于各種有機體中，低濃度時對于維持機體正常生理功能具有重要作用。然而，在食品發酵或者食物腐敗變質后，組胺含量明顯升高,在一些發酵食品和水產品中通常含有較高含量的組胺，食品中的組胺被人體過量攝入后會引起中毒現象。有報道稱當人體攝入 40 mg 以下組胺時就會產生輕微中毒癥狀，超過 40 mg 攝入即可產生中等中毒癥狀，大于 100 mg 攝入則產生嚴重中毒癥狀。攝入高濃度的組胺食品，會引起人眼結膜充血、頭昏胸悶等中毒癥狀，嚴重者甚至會致人死亡。由于攝入大量組胺引起的食物中毒時間時常發生，因此，許多國家和組織對食品中的組胺制定了嚴苛的標準。

目前水產品中組胺的檢測方法主要有比色法、薄層色譜法、生物傳感器法、毛細管電泳法和高效液相色譜法等。但大部分方法都比較繁瑣、費時、費力且成本高，而且檢測靈敏度和檢測范圍有待提高。由于酶聯免疫吸附測定方法有操作簡便、靈敏度高、成本低、便于大規模篩選等優點，目前已成為檢測食品中化學污染物的重要工具之一。國內有關食品中組胺的 ELISA 法較少，為了結合我國食品安全檢測的國情，更多的進行現場初篩再配合大型儀器進一步確認，探究方便高效的針對組胺殘留的免疫檢測方法，對于提高實際樣品檢測效率具有重要意義。對于 ELISA 法檢測組胺而言，由于組胺分子量低，分子特征不顯著，組胺抗體制備極為關鍵，直接與蛋白偶聯制備作為免疫抗原難以制備出特異性識別組胺的抗體，即使制備出來，由于其特異性和靈敏度太低，檢測限一般只能達到 mg/kg 級別，實際應用受限。因此通常的做法是將組胺衍生，制備特異性識別組胺苯醌衍生物的抗體，從而建立基于衍生間接檢測組胺的 ELISA 方法。本研究旨在通過制備針對組胺殘留檢測的有效抗體，建立一種與現有檢測方法相比更為靈敏、快速和可靠的免疫檢測分析法,并應用在實際樣品中組胺殘留的快速檢測，從而為水產品中組胺殘留檢測產品的開發提供技術支持。

組胺檢測標準曲線繪制

將包被濃度、抗體稀釋倍數、酶標二抗稀釋倍數以及競爭藥物濃度等優化到最佳狀態，根據最佳優化條件進行間接競爭 ELISA 測定，以組胺標準品濃度（μg/L）的半對數值為 X 軸，以 A450nm吸光度比值為Y 軸，繪制標準曲線圖。

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